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痰液标本做DNA提取的处理方法有哪些？
本人不是很清楚
我觉得可以参考：张军力, 托娅, 王育民. 不同的液化方法对痰液DNA提取效果比较[J]. 检验医学, 2009, 24(6):456-458
4种不同的液化方法 方法1:500 μ L痰液加入5 mL 1 mol/L氢氧化钠, 振摇液化30 min后, 14 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 沉淀用1.5 mL去离子水洗, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 留沉淀待用;
方法2:痰液中加入4倍体积的1 mol/L 氢氧化钠, 混合液化30 min, 80 ℃消化30 min, 取1.5 mL于离心管, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 沉淀用三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)和乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液洗3次, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 取沉淀待用;
方法3:Saccomanno液(每50毫升固定液中含50%乙醇48 mL, 2%聚乙二醇1 mL、0.3%利福平1 mL)、 二硫苏糖醇(DTT)液(0.1 g DTT、0.78 g氯化钠、0.02 g氯化钾、0.112 g磷酸二氢钠、0.02 g磷酸二氢钾, 加水至2 L, 使DTT浓度为0.005%[4])等体积混合, 1~2倍体积加入到痰液中, 振摇液化30 min;
方法4:痰液用1~2倍体积液化剂(0.5%N-乙酸-L半胱氨酸, 1.45%枸橼酸钠, 2%氢氧化钠)振摇液化30 min。
痰液中DNA提取***用经典的酚-氯仿抽提的方法。加等体积氯仿:异戊醇(24:1)混匀, 8 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心10 min, 转移上层水相, 加2倍体积无水乙醇和1/10体积3 mol/L醋酸钠, 混匀, -20 ℃ 60 min后, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心15 min, 以70%乙醇洗涤1~2次, 室温稍干燥后加入100 μ L Tris-HCl和EDTA缓冲液, 溶解DNA。
吸光度(A)检测 应用Beckman Coulter DU800型核酸蛋白分析仪检测波长为260和280 nm处的A。
该文认为方法3：Saccomanno法和DTT法的联合应用, 对痰液的固定液化效果较好, 有利于痰液DNA的提取
痰作为分泌物，常用来检测结核杆菌等细菌，分离导致呼吸系统感染的病毒（如流感***、呼吸道合胞***、副流感***、腺***和鼻***等）用于培养或提取***RNA或DNA进行定性和定量检测。还有就是分离脱落的呼吸道上皮细胞，进行形态或DNA/RNA分析和检测，以确定有无癌前病变或癌细胞，来进行肿瘤的筛查或早期诊断。由于痰标本中含大量粘蛋白，细胞碎片和其它杂质，故在进行各种检测前，一定要对标本进行预处理以去除粘蛋白等成分。通常用4%NaOH进行液化，当然也有其它方法，但都大同小异。然后用煮沸或蛋白酶、酚/氯仿等经典法提取DNA或RNA，也可用磁珠或离心柱方法分离DNA或RNA。
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